亚洲欧美日韩中文无线码,精品一区二区三区高清免费不卡,国产精品色午夜免费观看,国产精品va在线一区二区

酶聯免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以簡單地回答樣本中有多少蛋白質/多肽/抗體這一基本問題，是科研中比較常用的一種檢測方法。而這種簡單的分析方法的核心，就是標準曲線。沒有它，我們的實驗就變成了一個二元的“是/不是”測試。有了它，我們可以深入研究生物反應的細節。那么，是什么使得標準曲線如此強大呢?讓我們在ELISA的背景來討論這個問題。

簡單地說，標準品就是一系列已知目標蛋白數量的陽性對照。例如，如果對人類IgG進行ELISA檢測，標準曲線將包含逐漸減少的已知量的人類IgG，它會讓你立刻得出一系列的結論。

是否可以看到標準品的信號？如果可以，實驗是好的；如果沒有，就應該進行故障排除。也許抗體問題，或者系統中的其他東西沒有得到優化。

這是一個比較棘手的問題。當標準濃度下降時，信號是否減少？如果答案是肯定的，那就是一個好的開始。如果答案是否定的，可能在某些步驟引入了一些背景，或者移液管可能需要校準。

一組適當的標準品總是以空白結束，在空白孔中不存在標準品。如果空白孔OD值為>0.1，說明可能引入了一些背景。

 

 

這是我們市場部同事在做實驗培訓時做的“人C反應蛋白(CRP)酶聯免疫吸附檢測試劑盒（ELK1040）”這個指標的標曲數據（新人已記不清上一次拿移液器是多少年前）。

 

 

 

用于免疫檢測的所謂“標準曲線"其實稱為擬合曲線比較合適。免疫檢測時標準點（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度如果和相應的吸光度（OD）值如果能夠呈現直線關系當然是最理想的了，這時可以通過Excel等方便的獲得擬合曲線，進而推算出樣品的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況，標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線關系，這時就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進行選擇就是必要的了。

關于標準曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合，但都只適用于曲線的一部分，有的適用于前半段，有的適用于后半段，有的適用于中間一段，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的適用性。當然，如果用于定量，還是在中間一段較好。這些方法雖然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。關鍵在于你的標準曲線做到了S形的哪一部分，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。在S曲線的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部分可以用直線方程，中間部分可用對數方程，而中后段可用四參數。

目前國際上普遍采用的免疫檢測擬合方式是“四參數邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關系，從而進一步比較正確的獲得樣品中待測物質的濃度。其實，在一個長的區間內，Logistic應該都能擬合得較為理想。但并不是說它就是的。事實上不僅是ELISA，其它很多生物學反應都是S形曲 線，也都可以用Logistic曲線擬合。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。如果用來定量，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的，而兩端的平坦部分計算誤差會大，有時甚至會很大。

二、做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意

1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。

2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。

3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。

5、標準曲線的樣品數一般為7個點（除去零孔、背景孔），但至少要保證有5個點）。

6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.90（至少要有一個九），對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。