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方法一:使用Curve Expert1.4軟件(點擊下載Curve Expert1.4)
標準曲線的繪制
可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線,下面以“Curve Expert1.4”軟件為例,繪制ELISA標準曲線的方法如下;
1.啟動“Curve Expert”
2.X軸輸入標準品的OD值(雙抗夾心輸入OD-空白值),Y軸輸入所對應的濃度值,如圖:
3.單擊[運行] 按鈕,出現如下對話框
4.單擊[ok]按鈕,出現如下兩個對話框,關閉下面一個對話框
5. 在對話框的右上角出現一些曲線的名稱,從“1”開始依次點擊曲線名稱,在右下角會出現相應擬合的曲線。
(一般選擇第一個多項式擬合)
6. 根據擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊,出現如下對話框:
注意:選擇系數(即“r”值)最好的曲線方程來進行運算。在下面的對話框
右上角有“r”值 ,當“r”值越接近1擬合度越好
7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵,出現如下對話框:
8.輸入標準的OD值,單擊[Calculate]按忸,即可得到待測蛋白的實際含量(標本稀釋了N倍,運算出的數值應在乘以N)。
9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程,可在步驟6的對話框空白處右擊,選擇”Information”
10. 得到如下對話框:點擊“Copy”
在你需要的位置粘貼即可得到如下數據:
Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)
Coefficient Data:
a = -21.531017
b = 212.05019
c = -0.24054479
d = 0.018060778
11. 修改作圖中X,Y坐標軸高度以及相關屬性
選擇步驟9所示圖中的第二排“Graph Properties”,修改好后點擊OK保存
方法二: 使用OriginPro 2021軟件計算競爭法試劑盒ELISA結果
第一步:我們以PG(Progesterone) ELISA Kit 這個試劑盒為例
將標曲的數據復制粘貼在如下表框中
按下Ctrl+A鍵全選然后鼠標依次單擊,Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...
在Function Selection選項卡中,將 Category 參數設置為 Statistics
將Function參數設置為 Logistic
在Find X/Y選項卡中對 Find X from Y 進行勾選,然后單擊 Fit 鍵
橫縱坐標選擇Log10參數,注意from / to 的上下限值的選擇,完成后單擊OK 鍵
最后結果計算,競爭法由于OD值與樣品濃度成反比關系,所以不需要減去零孔背景值,如果是夾心法的試劑盒,則還需要事先在excel中減去背景值然后再依據教程進行計算。
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